Glikolisis dikawal ketat di tiga langkah pemangkinnya: fosforilasi glukosa oleh heksokinase, fosforilasi fruktosa-6-fosfat oleh fosfofruktokinase, dan pemindahan fosfat daripada PEP kepada ADP oleh piruvat kinase. Di bawah keadaan jenis liar, ketiga-tiga tindak balas ini tidak dapat diterbalikkan, mempunyai tenaga bebas negatif yang besar dan bertanggungjawab dalam pengawalseliaan laluan ini.[7] Aktiviti kinase piruvat dikawal secara meluas oleh efektor alosterik, pengubah kovalen dan kawalan hormon. Walau bagaimanapun, pengawal selia kinase piruvat yang paling ketara ialah fruktosa-1,6-bisfosfat (FBP), yang berfungsi sebagai efektor alosterik untuk enzim.